本课题组前期在胰腺癌病人的血清样本中,利用高效液相色谱和质谱技术,率先成功筛选了一种包含44个氨基酸的胰腺癌高表达候选因子,命名为DAP44(DTNBP1 Associated Peptide 44)。经生物信息学分析,发现其第1-36位氨基酸序列与dysbindin完全匹配,根据其第25-43位氨基酸序列设计并制备具有高敏感度的特异性抗体,并利用抗体初步设计了ELISA试剂盒,上述成果已获得国家发明专利:专利号201510400228.4;ZL201510400227.X。为进一步鉴定DAP44的肿瘤学表达特性,验证其作为胰腺癌特异性血清标志物的可行性,本项目拟在前期研究基础上:1.利用特异性抗体对DAP44的肿瘤表达进行组织学、血清学验证;2.设计并制备高敏感检测试剂盒,进行多中心、大样本血清学检测,鉴定DAP44对胰腺癌诊断的敏感性和特异性,评估其在胰腺癌诊断的应用价值,为胰腺癌的早期诊断提供新的分子诊断手段。
本课题组前期制备了DAP44特异性抗体并申请国家发明专利,本项目以此为基础制备DAP44 的ELISA试剂盒;并利用ELISA试剂盒检测胰腺癌病人血清中的DAP44水平,从而评估其诊断效率。因此,抗体的特异性和敏感性、配对抗体的选择及ELISA试剂盒的稳定性是本课题的技术核心。
本项目的主要创新点在于:
1.DAP44分子是本课题组通过反相液相色谱和质谱技术从胰腺癌患者血清中率先筛选的肿瘤候选因子,利用特异性序列合成抗体并初步设计了ELISA试剂盒,上述成果已申请国家专利,并获得国家专利授权,具有自主知识产权;利用特异性单克隆抗体对DAP44的检测也首次证实了其在胰腺癌中的高表达,首次证实了该分子的肿瘤学表达特性,对DAP44的进一步研究将为胰腺癌的分子诊断提供新的靶点。
2.生物信息学分析发现,DAP44的氨基酸序列与dysbindin存在完全匹配的片段,这也提示我们DAP44可能和dysbindin高度同源。前期利用dysbindin ELISA试剂盒对肿瘤患者的血清检测发现,dysbindin在胰腺癌患者血清中高表达,首次为dysbindin与胰腺癌的相关性提供了证据,率先提出dysbindin作为胰腺癌潜在标志物的可能。上述结果也高度提示DAP44作为肿瘤标志物的可能,并经预实验初步证实。(来源:陕西省科技协会)
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